Kako deluje komplet ELISA

Metoda sendviča z dvojnimi protitelesi 1. Paket: Z 0,05MPH9. karbonatni ovoj pufriramo, da razredčimo protitelo na vsebnost beljakovin od 1 do 10 µg/ml. Dodajte 0,1 ml, 4 stopinje C čez noč, v reakcijske luknje vsake plošče iz polistirena. Naslednji dan zavrzite raztopino v luknjo in jo 3-krat sperite s pralnim pufrom po 3 minute.

(na kratko, pranje, enako spodaj). 2. Dodajte vzorec: dodajte določeno razredčino vzorca za testiranje 0,1 ml v zgoraj-omenjeno pakirano reakcijsko luknjo, inkubirajte 1 uro pri 37 stopinjah C. Nato sperite.

(Istočasno naredite prazno luknjo, luknjo za negativno kontrolo in luknjo za pozitivno kontrolo). 3. Dodajte z encimom-označena protitelesa: V vsako reakcijsko luknjo dodajte sveže razredčeno z encimom-označeno protitelo (razredčitev po titraciji) 0,1 ml.

Inkubiramo 0,5 do 1 uro pri 37 stopinjah C in speremo.

4. Dodajte tekoči barvni zaslon substrata: v vsako reakcijsko luknjo dodajte začasni pripravek raztopine substrata TMB 0,1 ml, 37 stopinj C 10 do 30 minut.

5. Končna reakcija: Dodajte 2M žveplovo kislino 0,05 ml v vsako reakcijsko luknjo. 6. Rezultati določite: lahko na belem ozadju, neposredno s prostim očesom, da opazujete rezultate: temnejša kot je barva znotraj reakcijske luknje, močnejša je pozitivna stopnja, negativna reakcija je brezbarvna ali zelo plitva, glede na barvo se odraža v globini, glede na barvo

Optično prebrana vrednost Od: na testerju ELISA pri 450 nm (če je barvno upodabljanje BTS, potem 410 nm), do prazne kontrolne luknje nič, zaužite za merjenje vrednosti OD vsake luknje, če je večja od navedene vrednosti OD negativne kontrole 2,1-krat, to je pozitivno.

Posredno pravo

1. Uporabite embalažo za pufriranje, da razredčite znani antigen na 1 do 10 mg/ml, na luknjo plus 0,1 ml, 4 stopinje C čez noč;

2. Naslednji dan se umijte 3-krat;

3. Dodajte določeno razredčino vzorca (neznano protitelo) 0,1 ml v zgoraj-omenjeno zapakirano reakcijsko luknjo, inkubirajte 1 uro pri 37 stopinjah C, sperite;

4. (slepo, negativno in pozitivno luknjičasto kontrolo) v reakcijsko luknjico dodajte sveže razredčeno drugo protitelo z oznako encima (anti-protitelo) 0,1 ml;

5,37 stopinj C inkubacija 35-60 minut, pranje;

6. 'Zadnjič, ko ste se umili z DDW. Preostali koraki so enaki "metodi sendviča z dvojnimi protitelesi" od 4, 5, 6.